高質量的真核蛋白--優(yōu)化的哺乳動物細胞表達系
常見的蛋白表達方式有原核表達，真核表達兩種，其中真核表達系統(tǒng)又有三種，包括酵母表達系統(tǒng)，哺乳動物表達系統(tǒng)和昆蟲細胞表達系統(tǒng)。原核表達系統(tǒng)以經濟、高效著稱，但其缺乏翻譯后的加工機制，所以得到的蛋白有生物活性的幾率較??；昆蟲細胞表達系統(tǒng)涉及到桿狀病毒的使用，具有局限性；酵母表達系統(tǒng)表達量高、易純化但是蛋白易降解且表達量不可控；哺乳動物表達系統(tǒng)雖有接近機體天然形式的翻譯后加工機制，蛋白易保留生物活性，但又存在成本高、表達量低的缺點。
所以我們在構建蛋白表達平臺時，同時建立了原核表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)，并針對需要保留生物活性的蛋白，還建立了哺乳動物表達系統(tǒng)。在該系統(tǒng)中，還針對其表達量低的缺點進行了優(yōu)化。應用該系統(tǒng)表達蛋白時，我們進行的優(yōu)化及產生的效果列于下表。
表1. 哺乳動物表達系統(tǒng)的改進和效果
| 優(yōu)化條件 | 效果 |
| 自主構建的表達質粒pCCC3 | 強啟動子和增強子，增強轉錄效率 |
| 選用293F細胞系 | 提高表達量，人源細胞系，在表達人來源的蛋白時可以提供同樣的翻譯后加工修飾 |
| 選擇去信號肽的全長序列 | 獲取全長蛋白，保留生物活性 |
| 親和層析 | 獲得蛋白純度高，純度可達98% |
以人成纖維細胞生長因子（RPB882Hu61）為例，該蛋白經由哺乳動物細胞表達的產量可達到約110mg/L，蛋白經過純化后其純度約可達98%（圖1）。
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圖1. 成纖維細胞生長因子SDS-PAGE檢測
（泳道1，2：純化的成纖維細胞生長因子蛋白，泳道3：分子量marker）
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