ELISA法檢測細胞凋亡的優(yōu)勢
細胞凋亡，亦稱細胞程序性死亡，是細胞在一系列內(nèi)源性基因的調(diào)控下發(fā) 生的自然或生理性死亡的過程。細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞死亡形 式，根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區(qū) 別開來。
傳統(tǒng)的檢測細胞凋亡的方法有很多種，主要包括：
1. 細胞凋亡的形態(tài)學檢測，包括直接用光學顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯 微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡或透射電子顯微鏡等觀察是否有凋亡小體；
2. 磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV 法），包括用標記了的 Annexin-V 作 為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡來檢測細胞凋亡是否發(fā)生；
3. DNA ladder 檢 測 ， 又 被 稱 作 TUNEL 法 （ terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling）（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導 的 dUTP 缺口末端標記測定法）也稱 DNA 斷裂的原位末端標記法，這一方法 能對，DNA 分子斷裂缺口中的 3’-OH 進行原位標記，借助一種可觀測的標記物， 如熒光素，能對凋亡細胞的核 DNA 中產(chǎn)生的 3’-OH 末端進行原位標記，用熒 光顯微鏡即可進行觀察。
但是，以上的細胞凋亡檢測方法大部分都是定性而非定量檢測，很難通過 數(shù)據(jù)反映不同細胞的細胞凋亡程度的高低，其中雖然流式細胞術(shù)可定量檢測細 胞凋亡，但由于成本較高且需要流式細胞儀，同時對實驗人員的實驗技術(shù)要求 較高，因此對于初學者而言，往往需要大量的實驗經(jīng)驗積累才能得到較穩(wěn)定的 結(jié)果。而隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，ELISA 在細胞凋亡檢測中的作用得到 了越來越多研究者的關(guān)注。
Caspase 家族在介導細胞凋亡過程中的作用逐漸引起了研究人員的注意， caspase-3 作為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發(fā)揮著重要功 能。Caspase-3 正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段， 其被激活，活化的 Caspase-3 由兩個大亞基（17KD）和兩個小亞基（12KD）組 成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死 亡細胞，caspase-3 的活性明顯下降。根據(jù)這些特點，Cloud-Clone Corp. 開發(fā)了 胱天蛋白酶 3（CASP3，caspase-3）檢測試劑盒（SEA626Hu），其可定量測定 人血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液或其它相關(guān)生物液體中 CASP3 含量。
除此之外，Cloud-Clone Corp. 還開發(fā)了一些細胞凋亡調(diào)節(jié)蛋白的檢測試劑 盒，包括但不限于：凋亡相關(guān)因子（FAS）檢測試劑盒（SEA030Hu）、凋亡相 關(guān)因子配體（FASL）檢測試劑盒（SEA031Hu）、B-細胞淋巴瘤因子 2（Bcl2） 檢測試劑盒（SEA778Hu）、Bcl2 關(guān)聯(lián) X 蛋白(Bax)檢測試劑盒（SEB343Hu）、 腫瘤蛋白 p53（TP53）檢測試劑盒（SEA928Hu）。另一方面，Cloud-Clone Corp. 為了滿足不同實驗者的需要，還開發(fā)了除人物種之外的包括大鼠、小鼠、牛等 在內(nèi)其它物種的細胞凋亡相關(guān)蛋白檢測試劑盒，這些檢測盒都為細胞凋亡的檢 測提供了非常好的工具 （關(guān)于細胞凋亡檢測試劑盒的詳細介紹，還可參見：細 胞凋亡相關(guān)蛋白的系列檢測產(chǎn)品）。
與其它傳統(tǒng)檢測細胞凋亡的方法相比，ELISA 法檢測細胞凋亡具有操作簡 便、省時、靈敏度高、可同時檢測大量樣品等優(yōu)點，其與其它傳統(tǒng)檢測細胞凋 亡的方法比較總結(jié)如下圖：
| 名稱 | 定性/ 定量 | 操作技能 | 早期/晚 期 | 靈敏度 | 精確度 | 對實驗儀器要求 | 實驗成本 |
| 鏡檢法 | 定性 | 高 | 早期 | 低 | 低 | 需顯微鏡 | 低 |
| TUNEL法 | 定性 | 高 | 早期 | 低 | 低 | 需顯微鏡和石蠟切片機 | 高 |
| 流式細胞術(shù) | 定量 | 高 | 早晚期均可 | 高 | 高 | 需流式細胞儀 | 高 |
| ELISA法 | 定量 | 適中 | 早晚期均可 | 高 | 高 | 僅需酶標儀 | 適中 |
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