競爭抑制ELISA對小分子定量檢測的優(yōu)勢
通常意義上來說，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道爾頓（Dalton，Da）。在生物學(xué)領(lǐng)域，常見的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及醫(yī)學(xué)檢測中的激素等。
由于小分子通?；瘜W(xué)組分單一，化學(xué)結(jié)構(gòu)簡單且分子量小，所以不具備免 疫原的基本化學(xué)特性。因此，小分子直接免疫動物是不能激發(fā)免疫應(yīng)答而獲得 特異性抗體的，常用的免疫學(xué)檢測方法也很難對其進(jìn)行定量檢測。現(xiàn)有的針對 小分子定量檢測的方法主要為高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC），但是該方法對儀器設(shè)備及樣本性質(zhì)要求高，檢測耗 時(shí)較長，因此在一定程度上限制了小分子檢測的發(fā)展。
正由于市場需求與現(xiàn)有檢測方法的限制性不能達(dá)到統(tǒng)一，所以針對小分子 的檢測，我公司基于特有的小分子結(jié)構(gòu)改造及偶聯(lián)技術(shù)，研發(fā)了一系列的 ELISA 檢測試劑盒產(chǎn)品。我們首先通過對小分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，然后針對性地對其進(jìn) 行修飾并與特定的蛋白或多糖載體偶聯(lián)，以獲取具有免疫原性的完全抗原，此 后再用該抗原免疫動物制備并篩選特異性抗體。由于小分子結(jié)構(gòu)簡單，分子量 小，不具有兩個(gè)抗原識別位點(diǎn)，因此不能被兩種抗體同時(shí)識別，所以在建立 ELISA 方法的時(shí)候很難使用雙抗體夾心法。我們在獲得小分子偶聯(lián)物和特異性 抗體后，選用了競爭抑制法來建立 ELISA 的檢測。
ELISA 檢測法每次實(shí)驗(yàn)耗時(shí)約 2.5 小時(shí)，如果每次實(shí)驗(yàn)使用一個(gè) 96 孔酶標(biāo) 板，除去標(biāo)準(zhǔn)曲線使用的 6 個(gè)孔，剩余 90 孔均可用于樣本檢測，所以對于每個(gè) 樣本的檢測僅需要不到 2 分鐘。對小分子的定量檢測，ELISA 檢測法與常用的 HPLC 檢測比較，其優(yōu)勢見下表。
表 1. HPLC 與 ELISA 定量檢測小分子對比
| 項(xiàng)目 | HPLC | ELISA |
| 樣本體積 | 10-100ul | 50ul |
| 樣本性質(zhì) | 高 | 中 |
| 實(shí)驗(yàn)時(shí)間/樣本 | 30min | < 2min |
| 樣本數(shù)量 | 每管 1 個(gè)樣本 | 每塊板 90 個(gè)樣本 |
| 儀器價(jià)格 | 高 | 中 |
| 檢測價(jià)格 | 單個(gè)樣品所需費(fèi)用高 | 單個(gè)樣品所需費(fèi)用低 |
我公司研發(fā)的小分子類檢測試劑盒產(chǎn)品涉及多個(gè)學(xué)科，包含：醫(yī)學(xué)激素類 產(chǎn)品，例如：雌酮（CEB003Ge）、睪酮（CEA458Ge）等；生物學(xué)氨基酸、維 生素類產(chǎn)品，例如：精氨酸（CEB938Ge）、維生素 B1（CED053Ge）等，微生 物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品，例如：脂多糖（CEB526Ge）等；植物類相關(guān)產(chǎn)品，例如：脫落 酸（CEB218Ge）等。
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